蛋白质制剂低温保存的生化机制是什么

1.蛋白质变性:蛋白质变性是指在一些理化因素作用下,蛋白质分子空间结构破坏(但不涉及蛋白质分子一级结构的破坏),从而引起蛋白质理化性质改变、生物活性丧失的过程。

2.等电点:当蛋白质溶液处于某一pH时,蛋白质解离成正、负离子的趋势相等,即成为兼性离子,净电荷为零,此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。

3.分子病:分子病是指由于遗传上的原因而造成的蛋白质分子结构或合成量的异常所引起的疾病。

二.简答题

1.何谓蛋白质变性?变性因素有哪些?实际工作中是如何应用的?

蛋白质在某些理化因素作用下,其特定空间结构破坏而导致理化性质的改变和生物学活性的丧失,称为蛋白质的变性。

造成蛋白变性的因素:物理和化学因素。

物理因素:加热、加压、紫外线、超声波、X射线等。

化学因素:强酸、强碱、浓乙醇、重金属离子及生物碱试剂(十二烷基磺酸钠(SDS),苦味酸,三氯乙酸,钨酸)等。

临床应用举例:

1.加热、加压,应用:消毒灭菌。

2. 75%乙醇,应用:消毒灭菌。

3.紫外灯照射,应用:消毒灭菌。

4.生物碱试剂沉淀蛋白,应用:检测蛋白尿。

5.重金属离子沉淀蛋白,应用:中毒后高蛋白洗胃。

6.蛋白质制剂(如疫苗,酶制剂等)的低温保存。

2.以镰刀型红细胞贫血为例解释说明分子病。

做ELISA实验前，事先收集好的标本该如何处理？

这个问题由武汉新启迪生物来为您解答。
做ELISA实验，在处理样本前应该先了解收集样本的注意事项。
【标本收集注意事项】
1.收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2.血清和血浆避免使用溶血，高血脂标本。
3.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。
4.标本收集后若不及时检测，需按一次使用量分装，冻存于-20℃，-80℃电冰箱内，避免反复冻融。
5.可根据标本的实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) 。
6.收集标本，尽量做到双份的用量，避免一次实验失败，重复实验时标本缺失，从而耽误实验进程。
7.收集标本时，应该做好防护措施（比如戴手套，口罩，护目镜等），认为所有标本都具有一定的潜在危险性。
8.样本处理应该在生物安全柜里面，并且正确使用生物安全柜。

样本正确的处理方法应该是这样的：
【标本处理办法】
1.血清：将采集的全血静置冰箱4℃过夜，然后1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
2.血浆：用EDTA，枸橼酸钠，肝素等作为抗凝剂，加入血液混匀后，1000-3000rpm离
心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）
保存。
3.组织匀浆：切取组织块，0.01MPBS中过洗一次；按照1G组织加入5-10ml组织蛋白萃取试剂的比例，在冰水中匀浆。匀浆完成后，5000-10000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
4.细胞培养上清：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃（3-6个月）保存。
5.尿液，腹水，脑脊液等：1000-3000rpm离心10分钟，取上清立即测试，暂时不测可以放入-20℃（1-3个月）或-80℃3-6个月）保存。

注：样品稀释的一般原则
用户须查阅相关文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。

希望可以给您提供帮助，祝您科研顺利！