保藏菌种的方法有哪些？

一、保藏菌种的方法有哪些？

保存方法：

（一）培养基保存法

利用各种斜面和半固体培养基，加上石蜡油保存菌种，是一种最常用而又简易的保存方法。

1.普通琼脂斜面保存法：肠道杆菌、葡萄球菌等一般细菌可接种于不含糖的普通琼脂斜面上，斜面底部应加少许无糖肉膏汤，以防干涸。经35℃培养18～24h后，移种于4℃冰箱中，一般可保存一个月，每月传代一次。

2.血液琼脂斜面保存法：链球菌、肺炎链球菌应接种于血液琼脂斜面上，35℃培养生长后，置4℃冰箱中保存，链球菌须半个月至1个月移种一次，肺炎链球菌的新分离菌株须2～4天移种一次，以后逐渐延长移种时间，在适应后可延至半个月移种一次。

3.巧克力色斜面保存法：宜保存脑膜炎奈瑟菌，并在35℃孵箱中保存，一般每2天移种一次。

4.鸡蛋斜面保存法：适于保存含有Vi抗原的沙门菌属及其他含表面抗原的细菌，一般可保存一个月。

5.半固体穿刺保存法：将细菌接种于琼脂半固体或血清琼脂半固体内，经35℃培养18～24h，再以无菌方法加入灭菌的液体石蜡。高度约lcm，置4℃冰箱保存。保存时间可达3～6个月。

（二）干燥保存法

原理是将细菌体内的水分蒸发掉，使其处于休眠和代谢停滞状态，从而达到长期保存菌种的目的医|学教|育网搜集整理。菌种干燥后低温保存，可保存数年至十几年。

（三）冷冻干燥保存法

本法又称冷冻真空干燥法。它综合利用了各种有利于菌种保存的因素（低温、干燥和缺氧等），是目前最有效的菌种保存方法之一。用本法保存的菌种具有成活率高，变异性小等优点，保存期一般3～5年，有的可长达10年以上。

二、菌种斜面低温保藏法有哪些？

将需要保藏的菌种，接种在适宜的斜面培养基上，菌丝长满斜面时，用硫酸纸包扎棉塞或者硅胶塞，放置在4℃的冰箱中保藏，叫做斜面（菌种）低温保藏法。由于微生物的新陈代谢活动未停止，试管内培养基易失水变干。因此，保藏时间较短，不适于长期保藏。每隔3～6个月应转管一次。

草菇菌种不耐低温，需保藏在10～12℃之间。或在草菇菌落上灌注3～4毫升的防冻剂（10%的甘油）。

当菌丝长满斜面后，在无菌条件下，用无菌橡皮塞代替棉塞，并用石蜡密封，即可在室温或冰箱中保藏。

这种方法可防止杂菌污染，隔绝氧气，避免培养基干燥，使用方便。

据测定，保藏3年的菌种生活力仍很旺盛。

三、常用的菌种保藏方法有哪些？

菌种保存的方法有斜面低温保藏法、液体石蜡覆盖保藏法、沙土保藏法、滤纸保藏法、甘油管保存法、冷冻干燥保存法。1、斜面低温保藏法：将菌种接种到适合的固体斜面培养基上，用油纸将棉塞部分包扎好，然后转移至2-8℃的冰箱中进行保存。2、液体石蜡覆盖保藏法：使用液体石蜡将斜面菌覆盖住，使其和空气隔绝。

一、菌种保存的方法有哪些

1、斜面低温保藏法

（1）将菌种接种到适合的固体斜面培养基上，等到菌种充分生长过后，使用油纸将棉塞部分包扎好，然后转移至2-8℃的冰箱中进行保存。

（2）如果是霉菌、放线菌及有芽孢的细菌，一般可以保存2-4个月左右，需要移种一次。如果是酵母菌，一般可以保存2个月左右，需要每个月移种一次。

2、液体石蜡覆盖保藏法

（1）将液体石蜡装在三角烧瓶中，并使用棉塞塞好，用牛皮纸进行包扎，然后在0.1MPa，121.3℃的环境下灭菌30分钟左右，接着将其放置在40℃的温箱之中，将水汽蒸发掉。

（2）将需要保藏的菌种，用适合的斜面培养基进行培养，得到健壮的孢子或者是菌体。

（3）使用灭菌过的吸管将液体石蜡吸出，注入斜面上，用量为高出斜面顶端1cm左右为宜。

（4）将试管直立，放置在低温或者是室温之下进行保存。

（5）霉菌、放线菌、芽孢细菌可以保藏2年以上不死，酵母菌可以保藏1-2年，一般无芽孢细菌可以保藏1年，脑膜炎球菌可以保藏3个月左右（37℃环境下）。

3、沙土保藏法

（1）准备好河沙，加入10%稀盐酸，然后加热煮沸30分钟左右，将里面的有机质去掉，然后将酸水倒掉，用自来冲洗至ph为中性，接着烘干，过筛（40目筛子），去掉粗颗粒。

（2）准备好非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，浸泡洗涤数次，直至ph为中性，然后烘干，碾碎，过筛（100目筛子），去掉粗颗粒。

（3）将沙和土按照2：1的比例混合，装入试管或者是安瓿管中，塞好棉塞，在1212℃的环境下灭菌30分钟左右。

（4）将菌种在斜面培养基中培养，得到健壮的菌体，然后向斜面培养物中注入3-5ml无菌水，洗下细胞或孢子制成菌悬液。

（5）使用灭菌过的吸管吸取菌悬液，然后均匀滴入沙土管中（0.2-0.5ml/管）。如果是放线菌或霉菌，可以直接挑取孢子拌入沙土管中。

（6）真空抽去沙土管中的水分。

（7）将沙土管用火焰熔封，然后存放在低温(4-6℃)干燥处保藏，或者是将沙土管用牛皮纸或塑料纸包好，放置在干燥器内保存。

四、农业厌氧菌有哪些菌种？

厌氧菌有革兰阴性无芽孢杆菌、革兰阳性无芽孢杆菌、革兰阴性厌氧球菌、革兰阳性厌氧球菌和革兰阳性产芽孢杆菌。

厌氧菌也叫厌气菌。是一类在无氧条件下比在有氧环境中生长好的细菌，而不能在空气（18%氧气）和（或）10%二氧化碳浓度下的固体培养基表面生长的细菌。这类细菌缺乏完整的代谢酶体系，其能量代谢以无氧发酵的方式进行。它能引起人体不同部位的感染。

五、运用斜面低温方法保藏菌种要注意哪些问题？

基本原理微生物具有容易变异的特性，因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。 低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢能力降低的重要因素，所以，菌种保藏方法虽多，但都是根据这三个因素而设计的。 保藏方法1．传代培养保藏法 又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于4—6℃冰箱内保存。 2．液体石蜡覆盖保藏法 是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。 3．载体保藏法 是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。 4．寄主保藏法 用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法与冷冻干燥保藏法进行保藏。 5．冷冻保藏法 可分低温冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速冻结（约-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。 6．冷冻干燥保藏法 先使微生物在极低温度（-70℃左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。 有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。 器材细菌、酵母菌，放线菌和霉菌； 肉膏蛋白胨斜面培养基，灭菌脱脂牛乳，灭菌水，化学纯的液体石蜡，甘油， 五氧化二磷，河沙，瘦黄土或红土，冰块、食盐，干冰，95％酒精，10％盐酸， 无水氯化钙； 灭菌吸管，灭菌滴管，灭菌培养皿，管形安瓿管，泪滴形安瓿管（长颈球形底），40目与100 目筛子，油纸，滤纸条（0．5×1．2cm），干燥器，真空泵，真空压力表，喷灯，L 形五通管，冰箱，低温冰箱（-30℃），液氮冷冻保藏器。 操作步骤各保藏法的应用范围及优缺点下列各法可根据实验室具体条件与需要选做。 1．斜面低温保藏法 将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌充分生长后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2—8℃的冰箱中保藏。 保藏时间依微生物的种类而有不同，霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2—4 个月，移种一次。酵母菌两个月，细菌最好每月移种一次。 此法为实验室和工厂菌种室常用的保藏法，优点是操作简单，使用方便，不需特殊设备，能随时检查所保藏的菌株是否死亡、变异与污染杂菌等。缺点是容易变异，因为培养基的物理、化学特性不是严格恒定的，屡次传代会使微生物的代谢改变，而影响微生物的性状；污染杂菌的机会亦较多。 2．液体石蜡保藏法 （1）将液体石蜡分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌 30 分钟，然后放在40℃温箱中，使水汽蒸发掉，备用。 （2）将需要保藏的菌种，在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体或孢子。 （3）用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1cm 为准，使菌种与空气隔绝。 （4）将试管直立，置低温或室温下保存（有的微生物在室温下比冰箱中保存的时间还要长）。 此法实用而效果好。霉菌、放线菌、芽孢细菌可保藏2 年以上不死，酵母菌可保藏1—2 年，一般无芽孢细菌也可保藏1 年左右，甚至用一般方法很难保藏的脑膜炎球菌，在37℃温箱内，亦可保藏 3 个月之久。此法的优点是制作简单，不需特殊设备，且不需经常移种。缺点是保存时必须直立放置，所占位置较大，同时也不便携带。从液体石蜡下面取培养物移种后，接种环在火焰上烧灼时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅，应特别注意。 3．滤纸保藏法 （1）将滤纸剪成0．5×1．2cm 的小条，装入0．6×8cm 的安瓿管中，每管1—2 张，塞以棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌 30 分钟。 （2）将需要保存的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，使充分生长。 （3）取灭菌脱脂牛乳1—2ml 滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。 （4）用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。 （5）将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽气至干。 （6）将棉花塞入管内，用火焰熔封，保存于低温下。 （7）需要使用菌种，复活培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃破裂，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。 细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前两者可保藏2 年左右，有些丝状真菌甚至可保藏14—17 年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。 4．沙土保藏法 （1）取河沙加入10％稀盐酸，加热煮沸30 分钟，以去除其中的有机质。 （2）倒去酸水，用自来水冲洗至中性。 （3）烘干，用40 目筛子过筛，以去掉粗颗粒，备用。 （4）另取非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。 （5）烘干，碾碎，通过100 目筛子过筛，以去除粗颗粒。 （6）按一份黄土、三份沙的比例（或根据需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）掺合均匀，装入10×100mm的小试管或安瓿管中，每管装1g 左右， 塞上棉塞，进行灭菌，烘干。 （7）抽样进行无菌检查，每10 支沙土管抽一支，将沙土倒入肉汤培养基中，37℃培养 48 小时，若仍有杂菌，则需全部重新灭菌，再作无菌试验，直至证明无菌，方可备用。 （8）选择培养成熟的（一般指孢子层生长丰满的，营养细胞用此法效果不好） 优良菌种，以无菌水洗下，制成孢子悬液。 （9）于每支沙土管中加入约0．5ml（一般以刚刚使沙土润湿为宜）孢子悬液， 以接种针拌匀。 （10）放入真空干燥器内，用真空泵抽干水分，抽干时间越短越好，务使在12小时内抽干。 （11）每10 支抽取一支，用接种环取出少数沙粒，接种于斜面培养基上，进行培养，观察生长情况和有无杂菌生长，如出现杂菌或菌落数很少或根本不长，则说明制作的沙土管有问题，尚须进一步抽样检查。 （12）若经检查没有问题，用火焰熔封管口，放冰箱或室内干燥处保存。每半年检查一次活力和杂菌情况。 （13）需要使用菌种，复活培养时，取沙土少许移入液体培养基内，置温箱中培养。 此法多用于能产生孢子的微生物如霉菌、放线菌，因此在抗生素工业生产中应用最广，效果亦好，可保存2 年左右，但应用于营养细胞效果不佳。 5．液氮冷冻保藏法 （1）准备安瓿管用于液氮保藏的安瓿管，要求能耐受温度突然变化而不致破裂，因此，需要采用硼硅酸盐玻璃制造的安瓿管，安瓿管的大小通常使用75×10mm 的，或能容1．2mm 液体的。 （2）加保护剂与灭菌保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的细胞时，则将空安瓿管塞上棉塞，1．05kg/cm2，121．3℃灭菌 15分钟：若作保存霉菌菌丝体用则需在安瓿管内预先加入保护剂如10％的甘油蒸馏水溶液或10％二甲亚砜蒸馏水溶液，加入量以能浸没以后加入的菌落圆块为限，而后再用1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌15 分钟。 （3）接入菌种将菌种用10％的甘油蒸馏水溶液制成菌悬液，装入已灭菌的安瓿管；霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器，从平板内切取菌落圆块，放入含有保护剂的安瓿管内，然后用火焰熔封。浸入水中检查有无漏洞。 （4）冻结再将已封口的安瓿管以每分钟下降1℃的慢速冻结至-30℃。若细胞急剧冷冻，则在细胞内会形成冰的结晶，因而降低存活率。 （5）保藏经冻结至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷冻保藏器的小圆筒内，然后再将小圆筒放入液氮保藏器内。液氮保藏器内的气相为-150℃，液态氮内为-196℃。 （6）恢复培养保藏的菌种需要用时，将安瓿管取出，立即放入38—40℃的水浴中进行急剧解冻，直到全部融化为止。再打开安瓿管，将内容物移入适宜的培养基上培养。 此法除适宜于一般微生物的保藏外，对一些用冷冻干燥法都难以保存的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞均可长期保藏，而且性状不变异。缺点是需要特殊设备。 6．冷冻干燥保藏法 （1）准备安瓿管用于冷冻干燥菌种保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形状可用长颈球形底的，亦称泪滴型安瓿管，大小要求外径6—7．5mm，长105mm，球部直径9—11mm，壁厚0．6—1．2mm。也可用没有球部的管状安瓿管。塞好棉塞，1．05kg/cm2>，121．3℃灭菌 30 分钟，备用。 （2）准备菌种，用冷冻干燥法保藏的菌种，其保藏期可达数年至十数年，为了在许多年后不出差错，故所用菌种要特别注意其纯度，即不能有杂菌污染，然后在最适培养基中用最适温度培养，使培养出良好的培养物。细菌和酵母的菌龄要求超过对数生长期，若用对数生长期的菌种进行保藏，其存活率反而降低。一般，细菌要求24—48小时的培养物；酵母需培养3 天；形成孢子的微生物则宜保存孢子；放线菌与丝状真菌则培养7—10 天。 （3）制备菌悬液与分装以细菌斜面为例，用脱脂牛乳2ml 左右加入斜面试管中， 制成浓菌液，每支安瓿管分装 0.2ml。 （4）冷冻冷冻干燥器有成套的装置出售，价值昂贵，此处介绍的是简易方法与装置，可达到同样的目的。 将分装好的安瓿管放低温冰箱中冷冻，无低温冰箱可用冷冻剂如干冰（固体CO2）酒精液或干冰丙酮液，温度可达-70℃。将安瓿管插入冷冻剂，只需冷冻 4～5 分钟，即可使悬液结冰。 （5）真空干燥为在真空干燥时使样品保持冻结状态，需准备冷冻槽，槽内放碎冰块与食盐，混合均匀，可冷至-15℃。装置仪器，安瓿管放入冷冻槽中的干燥瓶内。 抽气一般若在30分钟内能达到93.3Pa（0.7mmHg）真空度时，则干燥物不致熔化，以后再继续抽气，几小时内，肉眼可观察到被干燥物已趋干燥，一般抽到真空度26.7Pa（0.2mmHg），保持压力6～8 小时即可。 （6）封口抽真空干燥后，取出安瓿管，接在封口用的玻璃管上，可用L 形五通管继续抽气，约10 分钟即可达到26.7Pa（0.2mmHg）。于真空状态下，以煤气喷灯的细火焰在安瓿管颈中央进行封口。封口以后，保存于冰箱或室温暗处。 此法为菌种保藏方法中最有效的方法之一，对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用，即使对一些很难保存的致病菌，如脑膜炎球菌与淋病球菌等亦能保存。适用于菌种长期保存，一般可保存数年至十余年，但设备和操作都比较复杂。

六、农业农村服务中心有哪些岗位？

农业农村服务中心是服务三农的知道重要部门，它主要有以下岗位：

主要负责农林牧渔业管理、农村、农技、农机、农经等工作。承担农林牧渔业新技术的引进、试验、示范和推广；承担农业农村公共信息服务、农田水利建设服务和农民公共培训教育等工作。

七、中温椴木香菇菌种哪些品种？

303、168、808香菇菌种适合椴木栽培。 种植椴木香菇时，需要在冬季时期，砍伐椴树并制作成椴木，再将椴木按照井字式叠放在一起，而且要在椴木上方搭建遮阳棚，避免香菇被强光直射，然后即可将香菇菌种接种至椴木上，并且要定期向香菇喷洒水分，促进其快速出菇。

八、污水处理中厌氧菌种有哪些？

一、将活性污泥池或生物池之进水与出水关闭，并保持曝气状态，PH值调适到6.5－7.8之间较佳。

二、按1立方水投放1公斤的比例，将菌剂一次性全部均匀投入曝气池中，比例可以依污水情况适量增减。

三、持续曝气24小时，使微生物激活，附著菌床并进行繁殖，达到活跃状态。

四、建议采用阶段式调适进水，以减小对微生物之冲击，运行第一天打开正常进水量的1／3，第二天打开2／3，第三天即可全开。

如进水量设计偏小，则可一次性全开。

五、监测与调适系统运行，约30天后若系统稳定，则无需再添加菌剂。

【产品功效与特点】 1、德丰生物第三代污水处理菌硝化细菌为德丰29年技术结晶，本土生产，菌种更符合本地，供货周期更短，价格更优！ 2、零污泥污水处理技术，一举攻坚污水处理程序中污泥排放之痛 3、具备超强去除BOD、COD、SS、氨氮、磷等污染物质，有效率达90-95%以上。

4、二沉池出水可直接达到国家一级A标准或相关标准。

5、一次性投入，系统稳定后无需持续投加菌种，大幅降低治污成本 6、污水处理菌硝化细菌具备显著的除臭效果，消除 NH3、P、H2S及有机酸之能力超强。

7、硝化细菌只需一次投放，系统稳定后无需持续添加菌种 8、第三代污水处理菌硝化细菌易培养、繁殖快、对环境有较强的适应能力和自然进化等特性，一旦出现新的污染化合物，它们也能逐步通过自发或诱导产生新的酶系，具备新的代谢功能，从而降解或转化新的化合物。

注意事项一、PH值 ：污水处理菌种硝化细菌PH的作用范围为6～8.5之间，更适使用范围在6.5～7.5之间。

二、温度：污水处理菌种硝化细菌温度的作用范围在10℃～38℃之间，更适作用温度为22～35℃。

；高于60℃会导致细菌的死亡；低于10 ℃时，细菌生长会受到限制。

三、DO溶解氧：在曝气池中，溶氧量应保持在3-6毫克/升； 充足的氧气能提高好氧细菌的降解污染能力。

四、盐度：污水处理菌种硝化细菌在海水和淡水中都适用，极限可耐受5％的盐度。

盐度小于0.5%直接投放即产生效果，实现自我平衡和扩繁。

盐度0.5%-2%之间约需要2-10天驯化适应该水质，实现自我平衡和扩繁。

盐度2%-4%之间约需要10-30天驯化适应该水质，实现自我平衡和扩繁。

五、抗毒性：污水处理菌种硝化细菌可以较有效地抵抗化学毒性物质，包括重金属等。

当受污染区含有杀菌剂时，应预先研究它们对微生物的作用。

六、储存方法：应密封贮存于阴凉、干燥处，不要与有毒物品一起存放。

九、长沙凯德壹中心有哪些品牌？

长沙凯德壹中心有很多品牌。因为长沙凯德壹中心是一个大型商业综合体，集购物、娱乐、餐饮等多种业态于一体，所以涵盖的品牌种类非常丰富。其中包括服装、鞋子、化妆品、珠宝饰品、数码电器、书籍文具、家居生活等众多品牌，如ZARA、H&M、NIKE、ADIDAS、GAP、莎莎、WATSONS、天梭、施华洛世奇、苹果、华为、联想、小米、麦当劳、星巴克等等，这些品牌均是该商业综合体的重要组成部分。

十、农业法中的农业生产有哪些？

农业指种植业、林业、畜牧业和渔业等产业，包括与其直接相关的产前、产中、产后服务。

制定农业法是为了巩固和加强农业在国民经济中的基础地位，深化农村改革，发展农业生产力，推进农业现代化，维护农民和农业生产经营组织的合法权益，增加农民收入，提高农民科学文化素质，促进农业和农村经济的持续、稳定、健康发展，实现全面建设小康社会的目标。